比较。 狒狒血浆中αCD40抗体的检测 定(ELISA)评估血浆中重组αCD40的检测。板涂有与麦芽糖结合蛋白融合的重组表达的恒河猴 CD40 蛋白胞外结构域(NHP 试剂资源),浓度为 0.01 mg ml -1并用 Super Block(Thermo Scientific,Woodstock,GA,USA)进行封闭。将处理前和处理后的样品连续稀释,铺板 1 小时,并用 PBS/
0.05% Tween 20 洗涤。通过与多克隆驴抗人 IgG 电话号码列表表(H+L) — 辣根一起孵育来检测循环 αCD40 抗体 2C10R4过氧化物酶(杰克逊免疫研究实验室,西格罗夫,宾夕法尼亚州,美国)。然后将板与 1-Step Ultra TMB ELISA 底物 (Thermo Scientific) 一起孵育。添加 TMB 终止溶液(目录号 52-00-01;KPL,盖瑟斯堡,马里兰州,美国),并在 Mithras LB 940 酶标

仪(Berthold Technologies,卡尔姆巴赫,德国)上在 450 nm 处读取吸光度。使用掺有已知量的 αCD40 的血清生成标准曲线,并用于计算血清中存在的 αCD40 浓度。 αCD40抗体水平的测量 通过 ELISA 测量狒狒抗体对 αCD40 的反应。用0.01 mg ml -1的处理抗体包被九十六孔板过夜在 PBS 中,然后用 Sup